Клинико-морфологическая характеристика поражений глаз дибензин [b,f] -1,4 - оксазепином.

Авторы: С.И. Толмачев, Л.А. Муковский, Н.В. Лапина, Р.И. Глухова, Ю.А. Хрусталева.

К слезоточивым или раздражающим веществам относятся химические соединения, называемые ирритантами, которые в незначительных концентрациях вызывают у человека временную (30-60 мин) потерю работоспособности (стоп - эффект), вследствие раздражения чувствительных рецепторов слизистых оболочек глаз, верхних дыхательных путей, а иногда и кожных покровов.

Для снаряжения средств самообороны Министерством здравоохранения РФ разрешено пять веществ: хлорацетофенон (ХАФ, CN), орто- хлорбензилиденмалонодинитрил (CS), дибенз [b, f]-[1,4] оксазепина (СR), морфолид пеларгоновой кислоты (МПК) и олеорезин капсикум (ОС) [1].

С увеличением числа пострадавших от воздействия слезоточивых или раздражающих веществ, входящих в состав композиции газового оружия, были проведены экспериментальные исследования с целью оценки поражающего эффекта ирритантов [2, 3, 4, 5]. Выполненные ранее исследования по изучению дибенз [b, f]-[1,4] оксазепина (СR) показали, что ирритант длительно сохраняется в окружающей среде, не теряя при том своей биологической активности [6, 7]. Вместе с тем, до настоящего времени в специальной литературе отсутствуют комплексные исследования по клинико-морфологической оценке поражений СR. Цель настоящего исследования — оценка клинико-морфологической картины поражений глаз лабораторных животных СR.

Материалы и методы

Экспериментальные исследования проведены на половозрелых кроликах породы «Шиншилла» обоего пола, массой 2,4—3,3 кг. В ходе эксперимента проводили инстилляцию 0,1% раствора СR в этаноле в конъюнктивальную полость глаз животных в объеме 0,1 и 0,2 мл, что составило 0,1 и 0,2 мг СR соответственно. При офтальмологическом осмотре оценивали следующие показатели: блефароспазм, слезотечение, гиперемию и отек конъюнктивы, роговичный и зрачковые рефлексы, светобоязнь. Наличие или отсутствие поражений роговицы определяли по результатам флуоресцеиновой пробы. Оценку степени выраженности симптомов раздражающего действия проводили в соответствии с Методическими указаниями «Медико-биологические и химико-аналитические испытания безопасности и эффективности газового оружия самообороны» [8].

Микроскопическому исследованию подлежали энуклеированные глаза экспериментальных животных через 7 и 14 суток, которые фиксировали в 10% нейтральном растворе формалина. Затем для гистологического исследования глаза обезвоживали в спиртах возрастающей концентрации и заключали в парафин. Парафиновые срезы толщиной 5 мкм окрашивали квасцовым гематоксилином Эрлиха и эозином. При морфологическом исследовании оценивали: характер повреждения и признаки регенерации эпителия, расстройства кровообращения, выраженность, глубину и распространенность воспалительной инфильтрации, наличие и характер грануляционной ткани.

Результаты исследований

Животные были разделены на две группы: I группа - 0,1 мг СR; II группа —0.2 мг СR.
Объективные данные по выраженности признаков поражения глаз в группах экспериментальных животных, выявленные при офтальмологическом осмотре в различные сроки представлены в Табл. 1.

Таблица 1. Выраженность признаков поражения глаз у кроликов при инстилляции раствора дибенз [b, f]-[1,4] оксазепина, (М±m , n=4)

Сразу после инстилляции исследуемых растворов в глаза экспериментальных животных отмечали блефароспазм продолжительностью 30 секунд (I группа) и 60 секунд (II группа). Затем в течение первых двух часов в обеих группах наблюдали обильное слезотечение, гиперемию конъюнктивы (Рис.1), выраженный отек (хемоз), серозное отделяемое. Роговица у 25 % животных I группы и 75 % II группы покрылась фибриновой пленкой, легко отделяющейся от подлежащих тканей. Роговичный и зрачковый рефлексы не изменены.

При осмотре животных через 24 часа и в последующие двое суток у 50 % животных II группы выявлена положительная флуоресцеиновая проба (Рис. 2), что указывает на повреждение роговицы (эрозии, язвы).

У животных I группы стихание реактивных явлений регистрировали на 5 сутки. Полное исчезновение реактивных явлений отмечено к 7 суткам.

У кроликов II группы реактивные явления со стороны конъюнктивы глаз сохранялись до 14 суток.

Таким образом, по результатам клинических наблюдений за животными в течение 14 суток установлено, что выраженность симптомов раздражения в группах в первые сутки практически не различается.

Рис. 1	Рис. 2

Рис. 1. Внешний вид глаза кролика через 30 минут после инстилляции 0.2 мг СR. Выраженная гиперемия и отек конъюнктивы, слезотечение.

Рис. 2. Внешний вид глаза кролика через 24 часа после инстилляции 0.2 мг СR. Выраженная гиперемия и отек конъюнктивы, флуоресцеиновая пробаположительная (эрозия роговицы).

Исключение составляет длительность блефароспазма. Вдальнейшем, интенсивность симптомов поражения и их продолжительность зависели от количества вещества, содержащегося в инсталлируемом растворе.

Для более детальной оценки поражающего эффекта СR в отставленные сроки была исследована гистологическая картина препаратов глаз.

Через 7 суток после инстилляции исследуемого раствора, была оценена гистологическая картина поражений, вызванных ирритантом СR в количестве 0,1 мг. Обращало на себя внимание незначительное количество некротизированного эпителия конъюнктивы глазного яблока, пласты эпителия имели незначительное количество вакуолизированных клеток, имелся выраженный отек эпителия, клетки гиперхромны, базолоидны. фиксировалось незначительное количество нейтрофилов в толще эпителия; регенераторные процессы и грануляционная ткань не выявлены; регистрировалось выраженное расширение кровеносных сосудов, периваскулярно — единичные нейтрофилы и лимфоциты; наблюдалась выраженная клеточность эпителия хрусталика (Рис.З).

Рис. 3	Рис. 4	Рис. 5

Рис. 3.  Гистологический препарат глазного яблока кролика на 7 сутки после инстилляции 0.1 мг СR. Отек эпитея, расширение кровеносных сосудов, отсутствие грануляционной ткани. Окраска гематоксилин и эозин, х400. 

Морфологическая картина после воздействия 0,2 мг вещества через 7 суток наблюдения была несколько отличной: незначительное количество некротизированного эпителия бульбарной конъюнктивы, клетки эпителия гиперхромны, уплощены, отмечается выраженная базолоидность их; зафиксировано незначительное количество нейтрофилов в эпителиальной оболочке; роговица с незначительным разволокнением соединительной ткани; наблюдалась умеренная вакуолизация цитоплазмы клеток эпителиальной оболочки хрусталика (Рис.4).

На 14 сутки у животных 1 группы микроскопическая картина изменений глаз была следующей: клетки эпителия гиперхромны, уплощены, некроз и дистрофические изменения не отмечаются; ткань роговицы нормального строения, незначительно утолщена, сосуды кровенаполненны; эпителий хрусталика гиперхромный, выражено базолоиден, определяется небольшое количество вакуолей в цитоплазме эпителиальных клеток.

Воздействие 0,2 мг СR привело к отеку эпителия роговицы (увеличение межэпителиальных пространств), вакуолизации, некроза эпителия не наблюдается (Рис.5).

В склере зафиксированы регенераторные процессы, выраженная васкуляризация, высокая клеточность за счет присутствия фибробластов; отмечается незначительное количество сегментоядерных нейтрофилов, соединительнотканный матрикс очагово разволокнен; эпителий хрусталика умеренно полиморфен, незначительно вакуолизирован, с тенденций к увеличению годности (регенераторные изменения).

Гистологические исследования проведенные на 14 сутки, выявили более выраженные структурные нарушения во II группе, в первую очередь касающиеся структуры роговицы. Так же как и при оценке клинической картины, наблюдавшиеся гистологические изменения позволяют зафиксировать наибольший поражающий эффект от воздействия вещества СR в количестве 0,2 мг, по сравнению с 0,1 мг.

Выводы

Таким образом, дибенз [b, f]-1,4- оксазепина обладает выраженным раздражающим действием на слизистые оболочки глаз. Несмотря на то, что клиническая картина раздражающего действия в первые сутки практически не отличалась в обеих группах, в дальнейшем интенсивность и продолжительность симптомов поражения зависела от количества вещества, попавшего на слизистые оболочки глаз. Это необходимо учитывать врачам клиницистам, токсикологам, судебно- медицинским экспертам при оценке симптомов поражения глаз при воздействии ирританта дибенз [b, f]-[1,4] оксазепина.

Литература

1. Колкутин В.В., Исаков В.Д., Бабаханян Л.А., Муковский Л.А. и др. Судебно- медицинская диагностика поражений глаз из газового оружия. Методические рекомендации. МО РФ,- Москва.- 2001. — 62 с.
2. Бинат Г.Н. Судебно-медицинская характеристика поражений средствами самообороны в аэрозольных упаковках, содержащих капсаиценоиды. Дис. канд. мед. наук. — СПб, 1999. — 140 с.
3. Лапина Н.В. Токсикологическая характеристика морфолида пеларгоновой кислоты. Дис. канд. мед. наук.-. СПб., 2006 — 112 с.
4. Панчишена В.М. Особенности поражений глаз аэрозольным газовым оружием и их лечение: Дис. канд. мед. наук. — СПб., 2007- 134 с.
5. Хрусталева Ю.А. Судебно-медицинская характеристика поражений, причиняемых из средства самообороны в аэрозольной упаковке «Черемуха 04»: Дис. канд. мед. наук. — СПб., 1998. — 150 с.
6. Лапина Н.В., Муковский Л.А., Глухова Р.И., Бабаина Е.В., Толмачёв С.П., Хрусталёва Ю.А. Сохраняемость дибензок- сазепина (СR) на объектах окружающей среды // 3-й съезд токсикологов России 2-5 декабря 2008 г. Тезисы докладов. Под редакцией акад. РАМН Г.Г. Онищенко и член-корр. РАМН Б.А. Курляндского.- Москва: 2008.-С. 171- 173.
7. Лапина Н.В., Муковский Л.А., Глухова Р.И., Толмачёв С.И., Хрусталёва Ю.А. Оценка биологической активности ди- бензоксазепина (CR) / / 3-й съезд токсикологов России 2-5 декабря 2008 г. Тезисы докладов. Под редакцией акад. РАМН Г.Г. Онищенко и член-корр. РАМН Б.А. Курляндского.- Москва: 2008.-С.170-171.
8. Медико-биологические и химико-аналитические испытания безопасности и эффективности газового оружия самообороны. Методические указания. - Утверждены первым Зам. Министра здравоохранения РФ 23.12. 1998 г. - М. - 71 с.